1.简述PEG修饰蛋白的优点及存在的问题。 2. 为什么细胞内蛋白质翻译后会被修饰？修改方法有哪些？ 3. 沉阳农业大学陈启军课题组首次报道了锥虫中乳酰化修饰的代谢调节作用_百度. 4. 乳酰化与乳酸的化学差异5. 蛋白质位点修饰会导致分子量更高吗？
1.具有官能团的聚乙二醇。目前主要用于蛋白质药物修饰，以增加体内半衰期，降低免疫原性。它还可以增加药物的水溶性。近年来，改性PEG在药物研发中得到广泛应用，在药效缓释方面发挥着重要作用。
2.用聚乙二醇修饰蛋白质的治疗益处包括减少肾脏和细胞清除率、延长半衰期；增强对蛋白水解的保护；并减少毒性。生物活性蛋白聚乙二醇化的目的是改善其药代动力学和药效学特性，同时保留天然蛋白的内在生物活性。
3、因此流出时间较长，峰值出现较晚。大分子物质穿过颗粒的外部，因此峰首先出现。以此为基础，可以分离不同分子量的物质。 PEG修饰的蛋白质的分子量比天然蛋白质大，因此比天然蛋白质更早达到峰值。偶联的PEG 越多，修饰的蛋白质峰越早。麦戈夫等人。使用GF柱分离PEG修饰的SOD，可以分离未修饰的、单点和两点修饰的SOD。
4、通过表面受体与细胞高度特异性结合。 PEG修饰后，其表面受体被覆盖，在一定程度上影响结合，因此活性降低。例如，尿酸酶可以氧化尿酸，它通过与底物共价结合来发挥作用。 PEG修饰不会影响其共价结合，也不会影响活性中心，因此活性几乎没有变化。
许多蛋白质还可以使用自催化结构域（例如自激酶和自蛋白水解结构域）进行自身修饰。翻译后修饰可以发生在蛋白质生命周期的任何阶段。
前体蛋白是无活性的，通常需要一系列翻译后加工才能成为有功能的成熟蛋白。加工的类型多种多样，一般分为以下几类：N端fMet或Met的切除、二硫键的形成、化学修饰和剪切。合成蛋白质时，20 种不同的氨基酸结合成蛋白质。
共价修饰：许多蛋白质可以用不同类型的化学基团进行共价修饰。修改后，它们可以处于激活状态或非激活状态。主要包括磷酸化、糖基化、羟基化、二硫键形成和亚基聚合等。
N-乙酰化：亮氨酸共翻译过程中的常见修饰。赖氨酸乙酰化受HAT 和HDAC 影响并调节基因表达活性。 Sirtuins：NAD 依赖性脱乙酰酶，对于基因沉默和长寿至关重要。乙酰化：作为一种非转录调节细胞生物信号，它与磷酸化、泛素化和甲基化交织在一起，共同塑造细胞命运。
据报道，翻译后修饰，如蛋白质琥珀酰化、磷酸化、糖基化等在宿主感染过程中发挥关键作用。 2020年4月，沉阳农业大学陈启军教授团队报道了全球首个非洲锥虫蛋白翻译后修饰图谱，系统、全面地揭示了蛋白质翻译后修饰驱动锥虫发育差异的分子机制[1] 。
1. 通过比较添加葡萄糖、葡萄糖类似物2-DG和LDH抑制剂的三个不同治疗组，发现增加葡萄糖浓度会减少锥虫中的乳酸，从而降低泌乳水平。在蛋白质水平没有变化的情况下，乳酸和乳酰化水平随着抑制剂浓度的增加而降低。
2.不同的是，乳酰化作为组蛋白的翻译后修饰，在基因转录调控中发挥作用。这一最新发现成为该领域的最新突破。它不仅帮助人们对乳酸的功能有了新的认识，也促使医学生物学家重新审视肿瘤研究中的经典机制“瓦尔堡效应”。
蛋白质的氨基酸组成和序列对相对分子质量有显着影响，因为不同的氨基酸有不同的相对分子质量，不同序列的数量、类型和相对位置也会影响分子量。蛋白质的翻译后修饰会影响蛋白质的相对分子量。这些修饰包括磷酸化、甲基化、糖基化等，同时也会计算这些修饰的分子量。
蛋白质分子量可能比预测值小，原因如下： 翻译后修饰：蛋白质在翻译过程中可能会经历各种修饰，如磷酸化、甲基化、糖基化等。这些修饰改变了蛋白质的质量，增加了其分子质量。重量。剪接变体：某些蛋白质可能具有多个可以产生剪接变体的位点。
(1)蛋白质磷酸化后分子量增加。设计实验：空白组（阴性对照），蛋白A基因敲除，蛋白B的western blot检测；实验组，对A蛋白进行RNA干扰，干扰前后进行Western印迹，B也进行；阳性对照，AB同时表达，针对B做western。同时，利用磷酸化抗体定性检测B.
存在问题：PEG修饰后蛋白质活性降低。 PEG是一种长链高分子。当与蛋白质修饰结合时，会破坏蛋白质和多肽药物的活性位点，或引起空间结构的变化，影响蛋白质与受体的结合。 经过PEG修饰后，蛋白质和多肽类药物的分子量变大，在体内的扩散速率降低，可能会影响药物向组织的转运，影响药物的疗效。 目标改性产物不纯，副产物难以分离。
基因分析只是一个估计，一个粗略的值，无需担心。因为蛋白质会有不同的构型、不同的剪接体和不同的翻译后修饰，这些都会极大地影响蛋白质的分子量。如果只是磷酸化修饰，对分子量影响不大，但如果有糖基化，分子量差异就会很大。
此外，一些目标蛋白可能具有糖基化位点或其他修饰位点，条带大小可能远远超过理论分子量。因此，有必要查阅文献或uniprot来了解蛋白质剪接体的大小和修饰位点。背景太高了。在部分WB结果中，条带外本应空白的背景也会有较深的颜色，这会干扰分析结果。而且，结果图像不美观，难以用于文章发表。
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