1.什么是细菌的有性繁殖？ 2. 什么是细菌杂交？ 3. 细菌二杂交时为什么要采用共转化？共转化效率如此之低。能不能先放诱饵质粒.
1.有以下几种方式发生：突变（细胞自身遗传密码随机变化）、转化（未修饰的DNA在溶液中从一种细菌转移到另一种细菌）、转染（细菌或细菌的DNA，或两者的DNA，通过噬菌体转移到另一种细菌），细菌接合（一种细菌的DNA通过两种细菌之间形成的特殊蛋白质结构与菌毛接合，转移到另一种细菌）。
2006年，莫诺首次参加冷泉港会议时，J. Leberberg和E. Tatum报道了细菌的有性繁殖现象，并指出细菌通过接合进行基因交换。从而为细菌遗传学研究开辟了新途径。 1953年，W. Hayes报道称，他筛选出一种能够进行高频率基因重组的大肠杆菌菌株。
3. 有性生殖：两性的生殖细胞融合产生受精卵，受精卵经过有丝分裂产生个体。无性繁殖：分裂和出芽。很像细胞分裂。
由于物种间两种细菌之间的基因交换并不相同，因此大肠杆菌与空肠弯曲菌的杂交比空肠弯曲菌与大肠杆菌的杂交常见二十倍，研究小组在4 月11 日报告了这一发现杂志《科学》号。
1946年，莱德伯格在耶鲁大学塔图姆教授的实验室中发现了细菌接合现象。仅就细菌接合的生物学意义而言，相当于高等动植物的有性繁殖。
细菌杂交只是遗传物质的混合。高等生物的杂交符合孟德尔遗传理论，即发生基因的分离和自由组合。两者都是混合体，但不是同一个概念。以上就是细菌与高等动植物中基因重组的区别。
后来，雅各布斯和E.沃尔曼发现细菌有类似于“雌性”和“雄性”的差异。细菌杂交实际上是供体细菌将基因引入受体细菌的单向过程。供体细菌的细胞质不进入受体。如果用机械方法破坏供体细菌和受体细菌之间的接触，杂交就会中断，转移的细菌“染色体”就会被破坏。
酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白质是否相互作用的方法。在实验中，蛋白A与转录激活因子连接，蛋白B与另一个转录因子（例如RNA聚合酶的亚基）融合。如果A 可以与B 相互作用，那么转录激活剂可以激活报告基因的转录，从而导致菌株发展出某些特征（抗性或在基本培养基上生长的能力），但反之则不然。
转化效率是筛选酵母双杂交文库成功的关键之一。特别是在筛选低丰度cDNA文库时，必须提高转化效率。转化时可以采用共转化或顺序转化。相比之下，共同改造省时省力。更重要的是，如果融合表达蛋白单独转化时会对酵母细胞产生毒性，则共转化可以减弱或消除这种毒性。
杂交效率低——可能是由于表达的融合蛋白对酵母细胞有毒性。在某些情况下，在液体培养基中生长不好的酵母在转移到琼脂糖固体培养板上时会生长得更好。这种情况，可以使用共变换的方法来测试；或者将单转化的酵母克隆铺展到五个10 mm 培养板上。待克隆长出后，将所有克隆刮入5 mL 0.5YPDA中。
不要同时将pGBKT7 和pGADT7 转移到细胞中。需要先转移一个，在平板上培养，挑取单菌落进行液体培养，然后再转移另一个质粒。同时转移两个质粒的效率太低。
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为了将外源DNA（重组质粒）导入大肠杆菌，首先必须制备能够吸收外源DNA分子的感受态细胞。在细菌中，只有极少数的细胞能够产生感受态细胞。此外，细菌的能力在短时间内发生。
好的。但必须进行严格的比较。 Y2H 的误报率很高。
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